Перегляд за Автор "Семенишин, Галина Мирославівна"

Зараз показуємо 1 - 2 з 2

Протеоліз казеїнових фракцій ензимами лактококів
(2020) Юкало, Володимир Глібович; Сторож, Людмила Анатоліївна; Семенишин, Галина Мирославівна
У процесах протеолізу білків молока важливу роль відіграють ензими протеолітичних систем молочнокислих бактерій. Причому для утворення біоактивних пептидів велике значення має специфічність протеолітичної дії їхніх приклітинних протеїназ. Більшість відомих на сьогодні методів, що використовуються для характеристики протеолізу, дають змогу встановити загальний ступінь протеолізу всіх білків молока. Існуючі методи визначення чутливості окремих білкових фракцій молока до дії протеолітичних ензимів часто є досить складними або довготривалими і не можуть бути використані для масових досліджень специфічності протеолізу окремих білкових фракцій молока. Особливо це стосується досліджень слабких протеолітичних систем штамів молочнокислих бактерій. У статті кількісно охарактеризизовано специфічність дії протеолітичних систем лактококів щодо основних фракцій білків казеїнового комплексу молока. Для дослідження використано дев’ять штамів молочнокислих лактококів підвидів Lcc. lactis ssp. lactis (I7, lg і lw), Ьсе. lactis ssp. cremoris (04, C10 і cu) і Lcc. lactis ssp. lactis biovar diacetilactis (d2, ds і du). Як субстрат виділено нативний міцелярний казеїн у системі «знежирене молоко-кислий полісахаридвода». Вміст нерозщеплених казеїнових фракцій після діїприклітинних протеїназ лактококів проаналізовано експрес-електрофорезом в однорідному поліакриламідному гелі. За результатами денситометрії отриманих електрофореграм досліджувані штами розділено на дві групи. До першої групи віднесено штами l10, ds, с4, сю, які краще розщеплюють f -казеїн, що характерно для приклітинних протеїназ типу Pi. Решта штамів переважно розщеплюють к- і as i-казеїни, оскільки в них наявна протеїназа типу Рш. Використання кількісного експреселектрофорезу та міцелярного казеїну як нативного казеїнового субстрату дасть змогу встановити специфічність приклітинних протеїназ молочнокислих лактококів. Enzymes of proteolytic systems of lactic acid bacteria play an important role in the milk proteins proteolysis processes. Moreover, the specificity of the proteolytic action of their cellenvelop proteinases is of great importance for the bioactive peptides formation. Most of the currently known methods used to characterize proteolysis allow to establish the total degree of proteolysis of all milk proteins. Existing methods for determining the sensitivity of individual protein fractions of milk to the action of proteolytic enzymes are often quite complex or time-consuming and cannot be used for mass studies of the specificity of proteolysis of individual protein fractions of milk. Especially this applies to studies of weak proteolytic systems of lactic acid bacterial strains. The aim of the study was to quantitatively characterize the specificity of the lactococcus proteolytic systems action in relation to the main fractions of milk casein complex proteins. Nine strains of lactic acid lactococcus of the subspecies Lcc. lactis ssp. lactis (I7, I9 and 1ю), Lcc. lactis ssp. cremoris (c4, ci 0 and ci i) and Lcc. lactis ssp. lactis biovar diacetilactis (d2, ds and dn ) were used for the study. Native micellar casein was isolated as a substrate in the system “skim milk—acid polysaccharide—watef’. The content of uncleaved casein fractions after the action of cell-envelop lactococcus proteinases was analyzed by express electrophoresis in a homogeneous polyacrylamide gel. According to the results of densitometry of the obtained electrophoregrams, the studied strains were divided into two groups. The first group includes strains li0, ds, c4, ci0, which better cleave p-casein, which is characteristic for cell-envelop proteinases of the PI type. The remaining strains mainly cleave k - and asi -caseins, because they contain proteinase of the PIII type. Thus, the use of quantitative express electrophoresis and micellar casein as a native casein substrate will allow to establish the specificity of cell-envelop proteinases of lactic acid lactococcus.
Характеристика молекулярних мас продуктів протеолізу концентрату сироваткових білків, отриманих за дії панкреатину
(2019) Юкало, Володимир Глібович; Дацишин (Костюк), Катерина Євгенівна; Семенишин, Галина Мирославівна
Дослідження останніх десятиліть свідчать про те, що цінність білків сироватки молока пов ’язана з їх біологічною активністю, що може проявлятися на рівні численних біоактивних пептидів. Такі пептиди впливають на ф ункції травної, серцево-судинної, нервової та імунної систем організму. Проте при використанні протеолізу в технологічних процесах переробки сироватки не завжди забезпечуються умови для утворення природних біоактивних пептидів (БАП). Можливість утворення природних біологічно активних пептидів тісно п о в’язана із ступенем протеолізу їх окремих протеїнів-попередників, а також молекулярно-масовим розподілом отриманих продуктів протеолізу. Як субстрат для проведення протеолізу було використано концентрат сироваткових білків (КСБ). Фракційний склад білків КСБ було визначено з допомогою експрес-електрофорезу в анодній системі однорідного поліакриламідного гелю (ПАГ). Протеоліз 15% КСБ проводили у фізіологічних умовах (рН 7,9; 37°С) при співвідношенні E:S = 1:20. Для характеристики молекулярно-масового розподілу відбирали зразки через 120 хвилин протеолізу. На цей момент кількість продуктів протеолізу, що не осаджуються 5-відсотковою трихлороцтовою кислотою становить більше 70%. Для проведення гельфільтрації продуктів протеолізу КСБ були вибрані три типи сефадексів: сефадекс G-10 (0— 700 Да), сефадекс G-25 (1000—5000 Да) і сефадекс G-50 (1500— 30000 Да). Перед гель-фільтрацією у відібраних взірцях осаджували нерозщеплені білки і поліпептиди трихлороцтовою кислотою. Застосування комбінації сефадексів G-10, G-25 i G-50 при гель-фільтрації продуктів протеолізу КСБ панкреатином у фізіологічних умовах дає змогу виділити п ’ять діапазонів пептидів і поліпептидів за молекулярними масами. До двох з них (0— 700 Д а і 700— 1500 Да) входять майже 40% всіх продуктів протеолізу, які можуть містити близько 80% усіх відомих БАП з протеїнів сироватки молока. Recent decades studies testify that the value of whey proteins is associated with their biological activity, which may be manifested at the level of numerous bioactive peptides. Such peptides can affect the functions of the digestive, cardiovascular, nervous and immune systems of the body. However, when proteolysis is used in the technological processes with milk whey, conditions for the formation of natural bioactive peptides (BAP) are not always provided. The ability to form natural biologically active peptides is closely associated to the degree of proteolysis of their individual proteins-precursor, as well as to the molecular weight distribution of the resulting proteolysis products. Whey protein concentrate (WPC) was used as the substrate for proteolysis. The fractional composition of WPC proteins was determined by express electrophoresis in the anode system of a homogeneous polyacrylamide gel (PAG). Proteolysis of 15% WPC was performed in physiological conditions (pH 7.9; 37°C) at the ratio of E:S = 1:20. Samples were taken after 120 minutes of proteolysis to characterize the molecular weight distribution. The amount of products after proteolysis that are not precipitated by 5% trichloroacetic acid is more than 70% at that moment. Three types of Sephadexes were selected for gel filtration of WPC proteolysis products: Sephadex G— 10 (0—700 Da), Sephadex G—25 (1000—5000 Da) and Sephadex G—50 (1500—30000 Da). Unsplit proteins and polypeptides in the selected samples were precipitated by trichloroacetic acid before the gel filtration. Use of Sephadexes G— 10, G—25 and G—50 combination in gel filtration of WPC proteolysis products by pancreatin in physiological conditions allows to isolate five ranges of peptides and polypeptides by molecular weight. Two of them (0—700 Da and 700—1500 Da) comprise almost 40% of all products of proteolysis, which can contain about 80% of all known BAP from milk whey proteins.