Вивчення Са2+-індукованих змін мембранного потенціалу мітохондрій міометрія з використанням методу протокової цитометрії

Abstract

Застосовуючи метод протокової цитометрії та потенціалчутливий флуоресцентний зонд TMRM, досліджували Са2+-індуковані зміни мембранного потенціалу в ізольованих мітохондріях міометрія. Додавання Са2+ (100 мкМ) до середовища інкубації індукує деполяризацію мітохондріальної мембрани, що, ймовірно, обумовлюється активацією Са2+/Н+-обмінника, функціонування якого спричинює дисипацію мембранного потенціалу. За наявності в середовищі інкубації 10 мкМ рутенієвого червоного (інгібітору електрофоретичної акумуляції іонів Са в мітохондріях) і 100 мкМ Са2+ дисипації мембранного потенціалу не виявлено. Отже, розсіювання потенціалу, вірогідно, пов’язано зі збільшенням концентрації кальцію в матриксі. За наявності Mg2+ (3 мМ) і АТР (3 мМ) додавання до середовища інкубації 100 мкМ Са2+ не зумовлює мембранної деполяризації. Це, ймовірно, пояснюється функціонуванням АТР-синтетази у зворотному напрямку як Н+-помпи, що запобігає дисипації мембранного потеціалу мітохондрій. Таким чином, метод протокового цитометричного аналізу дає змогу досліджувати мембранний потенціал в ізольованих мітохондріях гладенького м’яза матки, а також проводити скринінг ефекторів, які здатні модулювати цей параметр.