Використання методу протокової цитометрії для визначення вмісту Са2+ в мітохондріях та впливу на нього антагоністів кальмодуліну
Вантажиться...
Файли
Дата
2008
ORCID
DOI
Науковий ступінь
Рівень дисертації
Шифр та назва спеціальності
Рада захисту
Установа захисту
Науковий керівник
Члени комітету
Видавець
Анотація
Для дослідження акумуляції іонів Са в ізольованих мітохондріях міометрія використовували метод протокової цитометрії та флуоресцентні зонди. Внесення 1 мМ Са2+ до середовища інкубації, яке містило навантажені зондом fluo 3-AM мітохондрії, за присутності в ньому 5 мкМ кальцієвого іонофору А-23187 зміщувало геометричне положення піка інтенсивності флуоресценції зонда вправо. Збільшення інтенсивності його флуоресценції залежало від концентрації іонів Са в середовищі: підвищення її від 20 мкМ до 1 мМ за наявності в суспензії кальцієвого іонофору А-23187 зумовлювало зростання інтенсивності випромінювання. В разі моделювання функціонування Са2+-уніпортеру мітохондрій спостерігалось Са2+-індуковане збільшення інтенсивності флуоресценції зонда fluo 3-АМ залежно від концентрації катіона: за введення до суспензії 1 мкМ протонофору СССР та 20 мкМ Са2+ інтенсивність флуоресценції зонда залишалась на рівні контролю. У подальших експериментах вивчали вплив антагоністів кальмодуліну – кальмідазоліуму та трифлуопіразину – на вміст в мітохондріях іонізованого Са. Внесення 10 мкМ кальмідазоліуму або 100 мкМ трифлуопіразину до середовища інкубації повністю пригнічувало в органелах акумуляцію Са2+. При цьому, використовуючи потенціалочутливий флуоресцентний зонд TMRM, було встановлено, що антагоністи кальмодуліну також спричинюють деполяризацію мітохондріальної мембрани. Припускається, що гальмування надходження іонів Са до мітохондрій міометрія у присутності антагоністів кальмодуліну може відбуватися як через блокування утворення комплексу Са2+–кальмодулін і, відповідно, інгібування функціонування Са2+-уніпортеру, так і/або дисипацію мембранного потенціалу Δψ – рушійної сили акумуляції Са2+ в мітохондріальному матриксі.
Опис
Ключові слова
протокова цитометрія, ізольовані мітохондрії, мембранний потенціал мітохондрій, гладенькі м’язи, Cа2+, flow cytometry, isolated mitochondria, membrane potential, smooth muscles
Бібліографічний опис
Використання методу протокової цитометрії для визначення вмісту Са2+ в мітохондріях та впливу на нього антагоністів кальмодуліну / Л. Г. Бабіч, С. Г. Шликов, Н. В. Наумова (Кандаурова), С. О. Костерін // Український біохімічний журнал. – 2008. - № 4, Т. 80. – С. 51-58.